摘 要：目的：探討多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(SOX2)及微管不穩(wěn)定蛋白(Stathmin)在皮膚鱗狀細胞癌(cSCC)組織中的表達及臨床意義。方法：收集41例cSCC及25例皮膚良性增生性病變，免疫組化法檢測兩組病變SOX2、Stathmin蛋白表達水平，分析cSCC患者兩種蛋白陽性表達與年齡、性別、病理分化、糖尿病及復(fù)發(fā)情況的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組中SOX2和stathmin蛋白陽性表達率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組SOX2蛋白表達水平與發(fā)病部位和糖尿病史相關(guān)，Stathmin蛋白陽性表達與腫瘤病理分化相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：cSCC中SOX2和Stathmin蛋白高表達，二者可能參與其發(fā)生發(fā)展，并有望成為cSCC的免疫診斷標記。SOX2表達陽性的cSCC，發(fā)病部位和糖尿病史可能為有價值的診斷依據(jù)。
關(guān)鍵詞：皮膚鱗狀細胞癌; cSCC; SOX2; Stathmin;
皮膚鱗狀細胞癌(c SCC)是一種以角質(zhì)細胞異常增殖為特征的惡性腫瘤，其發(fā)病率隨人口老齡化發(fā)展逐年上升。本病臨床表現(xiàn)單一、病程長，反復(fù)摩擦感染常影響臨床判斷，不典型的病變，更易過診或漏診。研究c SCC早期高危特征和發(fā)生的分子機制，可為臨床提供重要信息。多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(SOX2)在哺乳動物胚胎發(fā)生和后來的生活中必不可少，異常表達卻非常有害，通過調(diào)節(jié)干細胞功能、細胞黏附、外基質(zhì)降解及血管生成等參與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)[1,2]。微管不穩(wěn)定蛋白(Stathmin)又稱癌蛋白，具有微管解聚活性，在有絲分裂調(diào)控中起關(guān)鍵作用，是腫瘤相關(guān)因子之一[3]。本研究檢測SOX2和Stathmin在c SCC和皮膚良性增生性病變中的表達情況，以期發(fā)現(xiàn)相關(guān)診斷標記和線索，為臨床提供預(yù)后信息及新的治療靶點。
資料與方法
選取2017-2020年北京市密云區(qū)醫(yī)院病理科存檔的皮膚鱗狀細胞癌切除標本41例為觀察組，良性增生性病變25例為對照組。觀察組男28例，女13例；年齡44～94歲，平均(70.54±13.19)歲；有糖尿病者21例，無糖尿病者17例(失訪3例)；發(fā)生于口腔相關(guān)上皮者7例，其他部位者34例。對照組男13例，女12例；年齡33～83歲，平均(56.20±14.18)歲；有糖尿病者10例，無糖尿病者15例；發(fā)生于口腔相關(guān)上皮者1例，其他部位者24例。兩組患者基本資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。
納入標準：(1)術(shù)前未接受過放化療。(2)手術(shù)切除為初次治療。(3)原發(fā)性腫物。(4)經(jīng)患者及家屬同意。
排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤者。(2)診斷不明確者。(3)復(fù)發(fā)病例。(4)不配合隨訪者。
方法：兩組均采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(SP)。10%中性福爾馬林固定的石蠟標本常規(guī)切片(厚度2～3μm)，脫蠟水化，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)液(PH8.0)高壓修復(fù)，冷卻至室溫，PBS緩沖液清洗。一抗(SOX2：中山金橋，20817571,Stathmin：中山金橋，21095421),37℃孵育1 h。PBS清洗后加酶標羊抗鼠二抗(中山金橋：17G87D11)。DAB顯色。蘇木素復(fù)染。乙醇脫水。二甲苯透明后封片。將已知陽性組織設(shè)為陽性對照，PBS液代一抗作為陰性對照。由2名經(jīng)驗豐富的主治醫(yī)師行獨立雙盲復(fù)閱判讀。
觀察指標：依據(jù)著色強度、陽性細胞百分比進行評分。著色強度：棕褐色計3分，棕黃色計4分，淺黃色計1分，不著色計0分；陽性細胞百分比：>75%計4分，50%～75%計3分，25%～50%計2分，≤25%計1分，無陽性計0分。以上兩項得分相加計總分，0～1分為陰性，2～7分為陽性。高分化鱗狀細胞癌巢近基底層陽性表達時，評為1分(陰性)。
統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)分析系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)處理，計量資料用表示，組間采用t檢驗；計數(shù)資料用[n(%)]表示，組間采用χ2檢驗；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果
SOX2和Stathmin蛋白在兩組患者中的表達。SOX2蛋白在正常皮膚未見表達，在c SCC中表達于腫瘤細胞核，個別胞質(zhì)陽性。Stathmin定位于胞質(zhì)，在正常鱗狀上皮基底及基底旁層表達，高分化鱗狀細胞癌巢近基底陽性表達，分化越差，信號越強。見圖1、圖2。
圖1 SOX2在癌組織中表達(10x)
圖2 Stathmin在癌組織中表達(10x)
兩組患者病變中SOX2和Stathmin蛋白表達率比較：觀察組SOX2和Stathmin在c SCC陽性表達率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。
表1 兩組患者病變中SOX2和Stathmin蛋白表達率比較
觀察組SOX2和Stathmin蛋白表達與臨床因素的關(guān)系：觀察組SOX2陽性表達與發(fā)病部位和糖尿病史相關(guān)，發(fā)生于口腔黏膜的鱗狀細胞癌SOX2蛋白陽性表達率明顯高于其他部位，有糖尿病史的cSCC患者SOX2蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Stathmin蛋白陽性表達與腫瘤分化呈負相關(guān)，中-低分化鱗癌Stathmin蛋白陽性表達率明顯高于高分化者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。
表2 觀察組SOX2和Stathmin蛋白表達與臨床因素的關(guān)系
討論
鱗狀上皮是表皮增殖單元發(fā)生一系列高度調(diào)控事件而逐漸分化成熟的，細胞分裂率、凋亡或傳輸時間等微小改變即可導(dǎo)致病理狀況，其調(diào)控異常是最可能誘發(fā)惡性腫瘤的原因。
SOX2對維持胚胎和干細胞群至關(guān)重要，可影響細胞增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。SOX2在食管鱗癌、膀胱癌前病變及小鼠侵襲性膀胱癌中持續(xù)表達，對腫瘤的啟動和生長十分重要，推薦SOX2作為尿路上皮癌標記及潛在靶點[4,5]。這與本研究結(jié)果所示SOX2蛋白在c SCC細胞核陽性表達，且陽性率明顯高于對照組結(jié)果相似。SOX2蛋白高表達于口腔相關(guān)的鱗狀細胞癌，可能與其上皮干細胞性及異質(zhì)性相關(guān)[6]。SOX2還可協(xié)同P63形成復(fù)合體，激活編碼GLUT1的內(nèi)含子增強子簇，提高GLUT1表達，介導(dǎo)糖酵解內(nèi)流過度激活，鱗狀細胞癌存在其表型，糖代謝異常時高度易感[7]。本研究結(jié)果顯示，有糖尿病史的c SCC患者SOX2蛋白陽性表達率高于無糖尿病史者，由此推斷，患者糖尿病史及血糖水平可作為c SCC診斷參考依據(jù)。
幾乎所有宮頸鱗癌和高級別上皮內(nèi)瘤變中Stathmin過表達，其蛋白及m RNA表達水平在食管鱗癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin高表達與腫瘤分化差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期晚和生存期短有關(guān)[9,10]?？谇击[癌過表達Stathmin可通過激活PI3K-AKT-m TOR信號通路來降低癌細胞對治療的敏感性。本研究結(jié)果顯示，Stathmin在c SCC的陽性表達率明顯高于對照組，且其陽性表達與腫瘤分化呈負相關(guān)，提示其表達與預(yù)后不良相關(guān)。
綜上所述，Stathmin和SOX2可作為c SCC診斷標記，陽性表達提示惡性，可協(xié)助鑒別病理形態(tài)相似的c SCC和良性增生性病變，并為臨床提供預(yù)后信息。患者糖尿病病史及血糖水平有可能作為c SCC的參考依據(jù)。
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文章名稱：多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及微管不穩(wěn)定蛋白在皮膚鱗狀細胞癌的表達及臨床意義
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