摘 要：目的 研究探討對于腦膠質(zhì)瘤患者進行替莫唑胺化療與HOXB9基因以及多重耐藥相關(guān)分子和耐藥分子的相關(guān)表達情況的相關(guān)性。方法 選取我院在2016年7月至2021年7月所接收和治療的經(jīng)過化療的腦膠質(zhì)瘤患者共80例，之后按照患者是否對替莫唑胺產(chǎn)生耐藥性分為耐藥組以及非耐藥組，兩組各40例，之后對比兩組患者的HOXB9基因以及相關(guān)的耐藥因子的具體表達情況。主要包括：P糖蛋白（P-gP）、O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）、人類mut-s同系物（hMLH）、人類mut-s同系物2(hMSH2)。結(jié)果 經(jīng)過對比可知，耐藥組的HOXB9以及P-gP、MGMT的陽性率為72.50%、77.50%、80.00%明顯高于非耐藥組的17.50%、20.00%、17.50%（χ2=24.444,P <0.05）,hMLH以及hMSH2的陰性率明顯高于非耐藥組（P <0.05）。經(jīng)過對其進行耐藥性回歸分析可知，高表達率HOXB9基因可能是替莫唑胺化療腦膠質(zhì)瘤患者耐藥的一個因素。結(jié)論 HOXB9基因與多個P-gp、MGMT、hMLH和hMSH2的分子密切相關(guān)，可能與腦膠質(zhì)瘤患者對替莫唑胺的耐藥有關(guān)。在治療中可以實時檢測患者的HOXB9的情況，若出現(xiàn)異常及時進行干預(yù)，可能有助于降低腦膠質(zhì)瘤對替莫唑胺的耐藥率。
關(guān)鍵詞：替莫唑胺腦膠質(zhì)瘤 HOXB9 耐藥分子 相關(guān)性
膠質(zhì)瘤生長迅速，具有較強的侵襲性，手術(shù)治療組織難度系數(shù)大，徹底清除病灶，許多藥物難以進入血腦屏障，化療藥物長期使用后會出現(xiàn)耐藥性，因此，即使是手術(shù)結(jié)合放療和化療的患者，也同時需要有效的治療基礎(chǔ)來提高化療的整體治療效果[1-2]。治療腦膠質(zhì)瘤的有效藥物包括替莫唑胺，但患者可能因耐藥性原因造成治療效果低下。以往的研究表明，替莫唑胺的耐藥與多藥耐藥蛋白有著緊密的聯(lián)系。多藥耐藥主要表現(xiàn)為多藥耐藥相關(guān)分子的異常表達，如P-GP、MGMT、DNA錯配修復(fù)（MMR）系統(tǒng)等[3-4]。h MLH和h MSH2基因是否穩(wěn)定直接影響細(xì)胞的修復(fù)功能，而HOXB9在乳腺癌、肺癌等多種疾病中表達不同。在促進腫瘤發(fā)展以及凋亡中起重要作用[5-6]。因此，研究HOXB9基因在腦膠質(zhì)瘤患者替莫唑胺化療中的表達是否具有合成代謝作用，以及HOXB9基因的表達與替莫唑胺化療耐藥之間是否存在一定的相關(guān)性，具有重要的臨床意義[7-8]。研究選取我院在2016年7月至2021年7月80例患者，觀察腦膠質(zhì)瘤化療患者HOXB9基因表達與多藥耐藥相關(guān)分子及上述指標(biāo)的關(guān)系?，F(xiàn)將具體內(nèi)容報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取我院在2016年7月至2021年7月所接收治療經(jīng)過化療的腦膠質(zhì)瘤患者共80例，按照患者是否對替莫唑胺產(chǎn)生耐藥性分別分為耐藥組及非耐藥組，兩組各40例。耐藥組中男21例，女19例，年齡在65～75歲，平均年齡（69.11±2.04）歲，非耐藥組中男20例，女20例，年齡在66～77歲，平均年齡（69.14±2.02）歲。兩組一般資料比較無明顯差異（P>0.05）。且所有患者及家屬均知曉此次研究。此次研究經(jīng)過醫(yī)院倫理會支持。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均經(jīng)過磁共振成像確診為腦膠質(zhì)瘤。(2)所有患者術(shù)后均接受化療。(3)所有患者病理組織為完全封閉狀態(tài)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴隨遠處轉(zhuǎn)移。(2)伴隨其他惡性腫瘤。(3)機體素質(zhì)低，不能忍受化療。(4)其他臟器功能障礙。
1.2 方法
所有儀器以及試劑：主要使用由中國科學(xué)院上海研究所生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所提供的人惡性膠質(zhì)瘤u251株；并且使用由Solarbio（美國）生產(chǎn)胎牛血清和DMEM，噻唑藍（MTT）試劑盒選用碧鹽田生物科技有限公司，Tranawall試驗箱由康寧（美國）制造，從AB-CAM（美國）中篩選出兔抗HOXB9和抗人Ig G二級抗體，Prime Script由上海吉馬制藥技術(shù)有限公司負(fù)責(zé)完成。CDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒由北京康美有限公司提供，用于熒光定量PCR。ENVISIONTM兔和大鼠染色試劑盒、SYBR Premix Extaq TM II試劑盒和抗MGMT、HMSH2與HMLH多克隆抗體分別選自上海基因公司、北京康威之生物技術(shù)有限公司、武漢寶西。樣品處理方法：所有樣品固定、脫水、切片、包埋、染色。以上操作嚴(yán)格按照試劑、儀器、試劑盒說明書進行，全過程由專業(yè)人員進行，嚴(yán)格質(zhì)量控制。
1.3 觀察指標(biāo)
(1)觀察兩組患者的H O X B 9基因、P-g P、MGMT、h MLH以及h MSH2的陽性率以及陰性率。其中HOXB9基因判定方法為：選擇5個視野高功率場（細(xì)胞數(shù)>200）觀察陽性細(xì)胞的染色強度，計算陽性細(xì)胞的占比。檢測規(guī)則為：陽性染色信號為核內(nèi)黃棕色顆粒，0為未染色，1為淺黃色，2為黃色，3為棕黃色；然后根據(jù)陽性細(xì)胞比例評分為0分（陽性細(xì)胞比例<5%）、1分（≥5%和<25%）、2分（≥25%和<50%）、3分（≥50%和<75%）和4分（≥75%）。相乘得最后分?jǐn)?shù)，并根據(jù)最終分?jǐn)?shù)計算著色程度。p-gp和mgmt檢測方法分為陽性（膠質(zhì)瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)可見棕色顆粒10%～30%）、強陽性（陽性細(xì)胞數(shù)≥30%）和陰性（陽性細(xì)胞少于10%）。HMLH和HMSH2通過隨機抽取10個高倍視野區(qū)的400個腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞的比例來測定的。陽性：腫瘤細(xì)胞可見棕黃色顆粒，陽性細(xì)胞比例≥25%；陰性：陽性細(xì)胞少于25%。在上述檢測結(jié)果中，以陽性切片為對照，5%胎牛血清替代原代抗體為陰性對照。本研究以陽性和強陽性均為陽性。(2)使用回歸分析HOXB9基因?qū)τ诮邮芴婺虬坊煹幕颊叩哪退幮浴?br />
1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
使用SPSS20.0軟件進行處理，計數(shù)資料行χ2檢驗與Logistic回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 HOXB9基因與多藥耐藥相關(guān)分子的表達
經(jīng)過對比兩患者的HOXB9基因與多藥耐藥相關(guān)分子的表達可知，耐藥組的HOXB9以及P-g P、MGMT的陽性率明顯高于非耐藥組（P<0.05),h MLH以及h MSH2的陰性率明顯高于非耐藥組（P<0.05）。見表1。
表1 兩組患者的HOXB9基因與多藥耐藥相關(guān)分子的表達比較[n(%)]
2.2 HOXB9基因?qū)τ诮邮芴婺虬坊煹幕颊叩哪退幮曰貧w分析
經(jīng)過分析HOXB9基因?qū)τ诮邮芴婺虬坊煹幕颊叩哪退幮钥芍?，以接受替莫唑胺化療的患者的耐藥性為因變量，以HOXB9基因為自變量，經(jīng)Logistic回歸分析證實HOXB9可能是影響患者耐藥的影響因素（P<0.05）。見表2。
表2 HOXB9基因?qū)τ诮邮芴婺虬坊熁颊叩哪退幮曰貧w分析
3 討論
膠質(zhì)瘤抗性機制是復(fù)雜的、多層次的。盡管對耐藥基因及其產(chǎn)物進行了許多臨床研究，但在接受化療的患者中，耐藥基因與其耐藥性之間的聯(lián)系尚不清楚。研究腦膠質(zhì)瘤患者的耐藥性對于降低其耐藥性和提高臨床化療效果至關(guān)重要[9-13]。研究表明，腦膠質(zhì)瘤患者化療耐藥是多種因素綜合作用的結(jié)果。膠質(zhì)瘤患者化療耐藥的原因主要包括：(1)化療對跨越屏障沒有幫助。(2)少量膠質(zhì)瘤藥物積累。(3)加速許多化療藥物的解毒和代謝。(4)DNA損傷和修復(fù)的影響等。近年來，腦腫瘤化療的臨床研究進一步發(fā)展，HOXB9基因及多藥耐藥相關(guān)分子P-g P、MGMT、HM-LH、h MSH2等的表達產(chǎn)物與腦膠質(zhì)瘤患者化療耐藥密切相關(guān)[14-17]。替莫唑胺含有大量咪唑嗪環(huán)，為首要化療藥物。它容易進入血腦屏障，引起細(xì)胞DNA烷基化，進而發(fā)揮毒性作用。其雖在一定程度上改善了患者預(yù)后，但療效較差，尤其對復(fù)發(fā)患者，主要原因是患者對替莫唑胺的耐藥增加。因此，探索一種有效逆轉(zhuǎn)耐藥的方法，對于提高該病患者的化療療效具有重要意義。
HOXB9基因?qū)儆贖OX家族。研究表明HOX家族成員在參與胚胎生長、干細(xì)胞自我修復(fù)和再生以及組織重建等生理過程的同時，還與許多外來生物的生長和進化密切相關(guān)。此外，它們可以編碼轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)它們之間的共同基因表達[18-20]。龍璐璐等[21]研究人員研究發(fā)現(xiàn)HOXB9基因是一種抑癌基因，HOXB9基因在甲狀腺乳頭癌的增殖中發(fā)揮著重要作用，可以成為治療的新目標(biāo)。這些結(jié)果表明HOXB9基因可能為治療提供新的思路。
MGMT是DNA修復(fù)酶，可以幫助染色體避免化學(xué)物質(zhì)造成的損傷，這些物質(zhì)有助于治療藥物的細(xì)胞解毒。P-g P分布在細(xì)胞膜上具有分泌和分泌功能，其主要生理功能包括維持正常生理、激素和轉(zhuǎn)化以及調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。吞咽、呼吸代謝和藥物解毒[22-24]。依賴能源的藥物出口泵不僅在抗腫瘤藥物的匯合點，而且在抗腫瘤藥物的交配點。因此一旦P-g P和抗腫瘤藥物結(jié)合起來，就可以通過ATP裝置產(chǎn)生能量，ATP裝置將致癌灶細(xì)胞泵出，并減少細(xì)胞中濃度改變，降低藥物作用，產(chǎn)生一定的耐藥性。其中h MLH和h MSH2是主要基因，對控制基因改變和保持功能的完整性十分重要。錯誤修復(fù)系統(tǒng)中的任何基因變化都可能導(dǎo)致細(xì)胞功能的喪失，使其錯誤復(fù)制或不穩(wěn)定[25-27]。本研究結(jié)果提示HOXB9基因的表達可能與腦膠質(zhì)瘤患者對替莫唑胺化療產(chǎn)生耐藥性有關(guān)。HOXB9基因的高陽性表達率可能是腦膠質(zhì)瘤患者對替莫唑胺化療耐藥的一個影響因素。且該結(jié)果與Bai等[28]研究結(jié)果中HOXB9基因陽性率具有一致性。因此該病患者在應(yīng)用替莫唑胺治療前，可以及時、合理地干預(yù)HOXB9基因的非正常表達，以降低其對治療的抵抗力。然而本研究中的樣本很少，其結(jié)論缺乏臨床證據(jù)證明。因此本項研究的可信度需要通過今后的進一步相關(guān)研究加以驗證，以指導(dǎo)臨床患者的化療。
綜上所述，HOXB9基因與MGMT、P-g P、h MSH2和h MLH密切相關(guān)，是膠質(zhì)瘤患者采用替莫唑胺化療后耐藥的危險因素。建議在進行替莫唑胺化療前，可對腦膠質(zhì)瘤患者進行HOXB9基因表達監(jiān)測，對于表達非正常的患者，及時進行針對性干預(yù)，有利于降低接受替莫唑胺化療的腦膠質(zhì)瘤患者的耐藥率。
參考文獻
[1]羅悅,尹如鐵.替莫唑胺在婦科惡性腫瘤治療中的研究進展[J].華西藥學(xué)雜志,2021,36(4):482-484.
[2]龐迪文,陳菲莉,郭漢國,等.大劑量甲氨蝶呤和替莫唑胺與利妥昔單抗聯(lián)合治療原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤患者的臨床療效[J].中國實驗血液學(xué)雜志,2021,29(4):1175-1180.
[3]曹杰,張杰,李民,等.調(diào)強適形放療聯(lián)合替莫唑胺對腦膠質(zhì)瘤患者生命質(zhì)量及血清VEGF、EGF水平的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2021,21(14):2735-2738,2743.
[4]方松.適形調(diào)強放療序貫替莫唑胺聯(lián)合阿帕替尼治療術(shù)后高級別腦膠質(zhì)瘤的療效[J].醫(yī)學(xué)理論與實踐,2021,34(14):2439-2441.
[5]羅剛,喻堅柏,陳濤,等.異檸檬酸脫氫酶1基因突變對替莫唑胺干預(yù)下腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞凋亡的影響[J].安徽醫(yī)藥,2021,25(8):1492-1496.
[6]龔巧英,熊文敏,吳新生,等.高級別膠質(zhì)瘤術(shù)后同步放化療+替莫唑胺長周期輔助化療的研究[J].實用癌癥雜志,2021,36(7):1202-1204,1210.
[7]申靜,楊延靈,勝照杰,等.替莫唑胺聯(lián)合貝伐珠單抗同步放療對老年惡性腦膠質(zhì)瘤患者的影響[J].臨床研究,2021,29(7):90-92.
[8] Cao H,Li X,Wang F,et al.Phytochemical-Mediated Glioma Targeted Treatment:Dr ug Resistance and Novel Deliver y Systems[J].Curr Med Chem,2020,27(4):599-629.
[9]宋世賓,仇文進,侯雨男,等.轉(zhuǎn)錄因子FOXC1影響膠質(zhì)母細(xì)胞瘤對替莫唑胺的化療耐藥性[J].癲癇與神經(jīng)電生理學(xué)雜志,2021,30(3):132-137.
[10]田風(fēng)富,張雪峰,張文杰,等.miR-370調(diào)控MGMT增強替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞化療敏感性的實驗研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2021,26(6):518-522.
[11]陳彬,徐廷偉.LncRNA LINC00261靶向miR-182-5p對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞替莫唑胺耐藥性的影響及其機制[J].中國老年學(xué)雜志,2021,41(19):4388-4394.
[12]毛丹丹,呂堯,揭園慶,等.長鏈非編碼RNA SNHG1對替莫唑胺誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成能力的研究[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2021,19(6):493-496,后插1.
[13]張文龍,桂慶紅.順鉑聯(lián)合替莫唑胺治療高級別腦膠質(zhì)瘤術(shù)后患者的效果及對不良反應(yīng)率的影響[J].首都食品與醫(yī)藥,2021,28(6):64-65.
[14]劉彥廷,羅然,朱岳峰,等.LncRNA CASC2通過ABCG2提高膠質(zhì)瘤細(xì)胞對替莫唑胺的敏感性[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2021,43(10):938-945.
[15]楊娜,翟蒙蒙,張敏,等.影響術(shù)后接受替莫唑胺聯(lián)合放療治療的腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后風(fēng)險因素分析[J].中國醫(yī)學(xué)工程,2021,29(2):48-51.
[16]許斐鈺,陳果,龍勝文,等.過表達TNFAIP1促進替莫唑胺對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251遷移和侵襲的抑制作用[J].激光生物學(xué)報,2021,30(2):178-184.
[17]張良龍,安宏偉,趙立智,等.LncRNA LINC00152過表達在替莫唑胺誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞周期阻滯中的作用機制探討[J].中國癌癥雜志,2020,30(5):328-334.
[18]余直臻,喻喆,方立萍.HOXB9基因與腦膠質(zhì)瘤替莫唑胺化療耐藥的相關(guān)性[J].中國老年學(xué)雜志,2021,41(3):491-494.
[19]戴橄,陳利玉,李太存,等.HCMV感染對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞HOXB1~4及HOXB9基因表達影響的研究[J].中國人獸共患病雜志,2004,20(7):613-616.
[20]趙海林,王璐璐,羅冬冬,等.替莫唑胺耐藥膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的構(gòu)建及欖香烯逆轉(zhuǎn)其耐藥性的研究[J].立體定向和功能性神經(jīng)外科雜志,2020,33(5):271-274.
[21]龍璐璐,吳朝陽,徐惠.MGMT在腦膠質(zhì)瘤中表達的臨床意義及替莫唑胺聯(lián)合放療對預(yù)后的影響研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2020,26(30):115-116.
[22]陳凡帆,陳壘,李宗陽,等.基因組挖掘輔助生物合成技術(shù)通過下調(diào)cIAP介導(dǎo)的PACS2降解和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體接觸位點從而克服膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的替莫唑胺耐藥[A].中國醫(yī)師協(xié)會、中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會.第十五屆中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師年會摘要集[C].中國醫(yī)師協(xié)會、中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會:中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會,2020:2.
[23]陳利玉,鄔國軍,戴橄,等.人類巨細(xì)胞病毒感染對人胚肺細(xì)胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表達的影響[J].湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2001,26(3):189-191.
[24] Qi Y,Liu B,Sun Q,et al.Immune Checkpoint Targeted Therapy in Glioma:Status and Hopes[J].Front Immunol,2020,11:578877.
[25] Codrici E,Enciu AM,Popescu ID.Glioma Stem Cells and Their Microenvironments:Providers of Challenging Therapeutic Targets[J].Stem Cells Int,2016,2016:5728438.
[26]楊成義,劉峰,何雨,等.CSNK1 A1基因在腦膠質(zhì)瘤患者中的表達及臨床意義[J].腫瘤預(yù)防與治療,2021,34(8):721-725.
[27]楊婷,顧太富,張冉,等.三維偽連續(xù)式動脈自旋標(biāo)記及體素內(nèi)不相干運動成像評估腦膠質(zhì)瘤IDH1基因分型[J].中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2021,37(7):979-983.
[28] Bai J,Varghese J,Jain R.Adult Glioma WHO Classification Update,Genomics,and Imaging:What the Radiologists Need to Know[J].Top Magn Reson Imaging,2020,29(2):71-82.
本文由中國期刊網(wǎng)首發(fā)，一個權(quán)威專業(yè)的學(xué)術(shù)論文發(fā)表知識網(wǎng)。
文章名稱：替莫唑胺治療腦膠質(zhì)瘤患者HOXB9基因、多重耐藥相關(guān)分子的表達與相關(guān)性
相關(guān)閱讀
